本公司生產(chǎn)的BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌BL21（DE3）菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì) 胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107，-70℃保存 6 個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不改變。 

基因型：F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）  

特  點(diǎn)：該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如 pET 系列）的基因。T7 噬菌體 RNA 聚合酶位于 λ 噬菌體 DE3 區(qū)，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作） 

1、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以 100ul 感受態(tài)細(xì)胞為例。 

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的 十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置 30 分鐘。 

3、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動(dòng)離心管。

4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上 相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。 

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取 100ul 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300ul 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù) 過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項(xiàng)： 

1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。 

2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。 

3、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源 DNA 量過多或體積過大 反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí) DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。 

4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。 

5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。