本公司生產(chǎn)的TOP10感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌TOP10菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10⁸cfu/ug，-80℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實(shí)驗(yàn)成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

TOP10菌株介紹

該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。其φ80,IacZ?M15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。

操作步驟

（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1、  取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。

注意：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、  向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），輕彈混勻，在冰浴中靜置30min。

3、  將離心管置于42℃水浴中放置60-90sec，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3min，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

注意：此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí)，可放置5-8min左右，如果室溫較低，可延長(zhǎng)時(shí)間至8-15min左右。條件允許建議使用42℃熱激方法。

4、  向每個(gè)離心管中加入900μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45min（150rpm），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5、  將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕地將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16h。

注意：涂布用量可根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4000rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩余的菌液再涂布新的培養(yǎng)平板）

注意事項(xiàng)

1、  感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2、  進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

3、  為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。